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慧穎生物提供優質血清,為實驗助力!
Gemini胎牛血清900-108
把細胞養好的三個關鍵要素是:良好的細胞來源,正確的實驗操作,以及合適的培養體系。其中“合適的培養體系”就是要創造適合細胞生長的環境,給細胞建立一個滿意的“家”,而胎牛血清就好比于這個家的裝修,可以提高細胞的居住環境和舒適性,讓細胞更好更快地生長
當然,胎牛血清并不是完美的,它除了可為細胞提供生長所必須的蛋白、細胞因子、激素和微量元素等多種營養物質,同時也含有內毒素、補體、抗體等對細胞生長有危害的成分,若選擇不當,不合適的FBS會嚴重影響細胞的生長狀態甚至導致細胞死亡。因此,FBS既是讓細胞快樂成長的*營養物,又是可能導致細胞死亡的“定時の炸的啊彈”!辛苦養起來的細胞可能因為FBS用錯而一切歸零……
近年來無血清培養基和非動物來源的培養基越來越受到關注,但目前大部分細胞還無法適用這些培養基,并且存在費用較高和細胞生長較緩慢的缺點,因此,含有FBS的*培養基仍然是目前主流的細胞培養體系。
那么,應如何為你的細胞選購FBS呢?選購FBS應考慮哪些標準?
1.產品檢測
每款FBS在生產上市之前,必須經過嚴格的質控檢測。
質控環節*,以確保上市的血清符合規定合乎規格,而血清產品分析證書(COA)就是FBS質控的重要體現。在COA中,常規的檢測指標包括內毒素、總蛋白、細菌、病毒等,例如我國藥典規定,FBS中內毒素含量應≤10EU/mL,另外總蛋白為30-50mg/mL、血紅蛋白檢測不高于30mg/dL。
2. 可追溯性
目前市面上存在較多以假亂真的FBS產品,科研工作者對血清的真實產地、來源難以鑒別。
血清行業協會(ISIA)實施了供應鏈可追溯性的行業標準,以確保FBS的質量和安全性。
例如,FBS供應商是否保留原產地的可追溯記錄?是否持有血清生產各階段處理、運輸和商業交易的文件?這些都是判斷FBS可追溯性需要考慮的因素。
3. 生長驗證
我們使用FBS目的是為了讓細胞更真實、健康地生長。在確保了FBS的來源真實性、安全可靠性后,下一步就要對FBS的質量,即培養細胞的效果進行鑒定了,而這也是決定細胞能否養好的關鍵。
在細胞培養過程,質量粗糙的FBS可能會導致細胞出現生長速度緩慢、不貼壁、容易老化等現象,從而導致實驗受阻。經過質量驗證的FBS,則可以十分確定這款FBS對哪些細胞具有良好的培養效果,進而判斷其能否把自己的細胞養好。對于質量優質的FBS,通常采用血清敏感性細胞(如干細胞)來進行培養驗證,若培養效果良好,則其他常規細胞系的培養就更不在話下。
4. 穩定性
FBS作為其他行業的副產品,其生產在本質上會受到天氣、食物供應、經濟條件和牛群規模及疫情等各種因素的影響,導致血清的供應可能出現貨源、價格及批次間的不穩定性,從而造成實驗的不順甚至實驗失敗。在過去,國內外已有多個實驗室出現過因血清批間差異大而導致實驗結果無法重復的情況,浪費了巨大的時間和金錢成本。
因此,找到穩定提供同批次FBS的供應商,對于確保自己細胞實驗結果的真實性和可重復性具有重要意義,而且花在重復實驗或檢驗新批次上的時間將大大減少。
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實驗室操作中要注意及處理方法:
1. 血清保存: 建議血清應保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
3. 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
血清中沉淀物的出現有許多種原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
5. Gemini血清有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保血清的質量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?
胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。
7. 如何避免沉淀物的產生?
解凍Gemini血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多