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人結(jié)腸癌細(xì)胞系：SW48細(xì)胞，SW480細(xì)胞，CACO-2細(xì)胞，SW620細(xì)胞，HCT-8細(xì)胞，HCT/V細(xì)胞，HCT-116細(xì)胞，LoVo細(xì)胞，HRT-18細(xì)胞，HT-29細(xì)胞等
人宮頸癌細(xì)胞系：hela細(xì)胞，HT-3細(xì)胞，C33A細(xì)胞，SN12C細(xì)胞，SKG-IIIa細(xì)胞，Hela S3細(xì)胞，DoTc2-4510細(xì)胞，Ca Ski細(xì)胞 ，ME-180細(xì)胞等
人卵巢細(xì)胞系：KGN細(xì)胞，COV434細(xì)胞，IOSE80細(xì)胞，SKOV3細(xì)胞，OVCAR3細(xì)胞，HEY細(xì)胞等
DC2.4細(xì)胞株 MC38細(xì)胞株，MLE-12細(xì)胞，bEND.3細(xì)胞 HT-22細(xì)胞，HK-2細(xì)胞 THP-1細(xì)胞 WRO細(xì)胞 FRO細(xì)胞 Molt-4細(xì)胞系 SH-SY-5Y細(xì)胞 U87-MG細(xì)胞
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c3h10t1/2細(xì)胞，鼠間充質(zhì)細(xì)胞株 （細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種，分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染，那么他們污染細(xì)胞的特點(diǎn)分別是什么呢？怎樣能夠減少污染現(xiàn)象的發(fā)生？）
1-細(xì)菌
細(xì)菌污染常見的有大腸桿菌，葡萄球菌等。細(xì)菌污染較易發(fā)現(xiàn)，在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，培養(yǎng)液一般會(huì)在短時(shí)間內(nèi)變黃，有時(shí)靜置的培養(yǎng)液不混，稍加震蕩會(huì)有很多混濁物漂起。顯微鏡下可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮，有時(shí)在細(xì)胞表面及周圍有大量細(xì)菌存在，細(xì)胞停止生長(zhǎng)并有中毒表現(xiàn)。
處理：①在培養(yǎng)液中加入相應(yīng)的抗生素，能夠預(yù)防絕大多數(shù)的細(xì)菌污染。
2-真菌
真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種，尤其梅雨季節(jié)快要到了，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)更易污染。污染細(xì)胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不混濁，倒置顯微鏡下可見于細(xì)胞之間縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲，并懸浮飄蕩在培養(yǎng)液中。
很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形態(tài)呈卵形，散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長(zhǎng)。鏡下看時(shí)，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長(zhǎng)的菌絲相混淆。
真菌污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，但zui后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。真菌生長(zhǎng)的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。
3-支原體
支原體的大小介于細(xì)菌和病毒之間，是一種獨(dú)立生活的微生物。對(duì)熱敏感，對(duì)一般抗生素不敏感。支原體的形態(tài)多變，多吸附在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。電鏡下觀察，中心有高密度的密集顆粒，橫斷面與細(xì)胞微絨毛相似。
因國內(nèi)的血清大多數(shù)都沒有做支原體陰性檢測(cè)，而支原體又是牛血清中zui常見的微生物之一。支原體污染細(xì)胞后，培養(yǎng)液輕微發(fā)生混濁．但細(xì)胞變化不顯著，隨著細(xì)胞的培養(yǎng)會(huì)慢慢死亡。
支原體污染檢測(cè)（熒光染色法）：DNA和與DNA特異性結(jié)合的熒光染料結(jié)合，使得支原體的DNA著色，然后用熒光顯微鏡觀察。鏡下支原體為散在于細(xì)胞同圍或附于細(xì)胞膜表面的亮綠色小點(diǎn)。
解決：
1）抗生素排除法：支原體污染預(yù)防比解決好。如果不小心污染后，可加入高濃度抗生素（常規(guī)使用的5倍濃度）作用24-48小時(shí)，再換入常規(guī)培養(yǎng)液，但該法不保證有效。推薦用量：慶大霉素 200μg/ml ,四環(huán)素10μg/ml ，卡那霉素50μg/ml 。
2）加溫除菌：支原體不耐熱，可以對(duì)支原體污染的細(xì)胞熱處理除菌。因高溫對(duì)細(xì)胞本身也會(huì)產(chǎn)生一定影響，故熱處理前需先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定對(duì)細(xì)胞影響zui小而能zui大程度的殺死支原體的時(shí)間。
4-黑膠蟲
黑膠蟲的存在目前尚有爭(zhēng)議，其在低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失，除更換血清外無須特殊處理。
5-原蟲
培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)，zui終形成惡性循環(huán)。
6-病毒
組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如果沒有除去潛在的病毒，就會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。 盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
7-非同種細(xì)胞污染
即細(xì)胞交叉污染，由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開，往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。目前，世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無效。非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生，大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。
污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵，預(yù)防和避免污染是成功培養(yǎng)細(xì)胞的關(guān)鍵之一。危機(jī)意識(shí)要貫徹實(shí)驗(yàn)的始終，否則不僅浪費(fèi)時(shí)間，而且浪費(fèi)人力、物力，甚至造成無法彌補(bǔ)的損失。
（如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)的污染和清除這些污染物呢？）慧穎 細(xì)胞庫 技術(shù)為您解答：
一、污染的預(yù)防
預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：
1-從操作者做起
1操作者責(zé)任心要強(qiáng)，要細(xì)心穩(wěn)重，操作技術(shù)要熟練。進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿隔離衣。進(jìn)入后關(guān)好門，坐下來盡量少走動(dòng)。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大批污染。
2、操作者動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。
3、操作時(shí)要常更換吸管，切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾，保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺(tái)面。
2-從物品、用品消毒滅菌著手
細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
3-防止細(xì)胞交叉污染
在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，做上標(biāo)記便于辨別。并按順序進(jìn)行操作，避免一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生混亂。
在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。
所有細(xì)胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇，重新培養(yǎng)。
二、污染的清除
培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之；有細(xì)胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。
1-使用抗生素
抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL），污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進(jìn)行治療。近年來有報(bào)道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對(duì)殺滅支原體有效。這三種抗生素均用PBS配成250濃縮液，-20℃保存?zhèn)溆茫褂脻舛菴ip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用時(shí)先吸除污染的培養(yǎng)液，加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液，3天后再吸除培養(yǎng)液，加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)4天，如此連續(xù)3個(gè)輪次，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后，再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次。
2-使用支原體特異性血清
用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價(jià)1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。
3-加溫處理
將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對(duì)細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，摸索能zui大限度殺死支原體又對(duì)細(xì)胞影響zui小的加熱時(shí)間。此法有時(shí)不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。
4-其他方法
除了上述去除污染的方法外，還有動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等，但均較麻煩，且效果不確定。所以一旦支原體污染，除非有特別重要價(jià)值，一般均棄之重新培養(yǎng)。
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SUNE-1亞株9-4E | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SUNE-1(低分化鼻咽癌細(xì)胞) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SUNE-1亞株-5-8F（高成瘤，高轉(zhuǎn)移，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
F2-2(5-8轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細(xì)胞系) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SUNE-1亞株6-10B（只成瘤，不轉(zhuǎn)移，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
HNE2-LMP1（鼻咽癌細(xì)胞系） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
C666-1（EBV陽性鼻咽癌細(xì)胞系，進(jìn)口優(yōu)級(jí)胎牛血清培養(yǎng)） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
TMNE (化學(xué)轉(zhuǎn)化小鼠鼻咽上皮細(xì)胞) | 小鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
FAT (大鼠鼻咽癌細(xì)胞) | 大鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
RBE (膽管癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
QBC939 (膽管癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
HRT-18(結(jié)直腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
LoVo(結(jié)直腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SW620 (結(jié)腸癌細(xì)胞，P53-) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SW480 (結(jié)腸癌細(xì)胞，P53+) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
CMT93(鼠結(jié)腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 小鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
HCT-8 (回盲腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
HT-29 (結(jié)腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
HCT-116 (結(jié)腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
HCT-8/VCR(耐長(zhǎng)春新堿結(jié)腸癌細(xì)胞, VCR終濃度1µg/ml) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
CaCo-2(結(jié)腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
CT-26.WT(鼠大腸癌細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清) | 小鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
RB (視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
PC12(腎腺噬鉻細(xì)胞瘤，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 大鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
U251 (星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
C6 (大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞) | 大鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
GH3(埀體瘤細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 大鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
U87-MG(人惡性腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SHG-44（人惡性腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SH-SY-5Y（神經(jīng)母細(xì)胞瘤，進(jìn)口優(yōu)質(zhì)胎牛血清） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
SK-N-AS（人腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
MV-4-11（人急性白血病細(xì)胞，進(jìn)口優(yōu)質(zhì)胎牛血清） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
NB4（人急性早幼粒白血病細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
MEG-01（巨核急性白血病細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
Jurkat (急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
Kasumi-1(急性成髓細(xì)胞白血病，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
HL-60 (原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
B95-8 (產(chǎn)EBV的絨猴白細(xì)胞) | 猴 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
P3HR1 (EBV陽性B淋巴瘤細(xì)胞) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
K562 (慢性髓原白血病細(xì)胞) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
Raji (Burkitt\s淋巴瘤細(xì)胞) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
Molt-4(T淋巴細(xì)胞白血病,CD8+，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
THP-1(急性單核白血病細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)) | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
S180（艾氏腹水瘤細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)） | 小鼠 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
FRO（人低分化甲狀腺癌細(xì)胞） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
WRO（人低分化甲狀腺癌細(xì)胞） | 人 | 細(xì)胞株培養(yǎng)|價(jià)格 | 慧穎生物 |
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