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產品名稱:TRIZOL REAGENT試劑
品牌:Invitrogen
貨號:15596-026
規格:100ML
優惠價格:請致電
包裝:TRIZOL溶液,棕色瓶裝
現貨狀態:現貨
Invitrogen原裝TRIZOL REAGENT(貨號:15596-026)操作說明:
從組織中提取總RNA 1)液氮研磨,組織塊直接放入研體中,加入少量液氮,迅速研磨,待組織變軟,再加少量液氮,再研磨,如此三次,按50-100mg組織/mlTrizol加入Trizol,轉移入離心管進行第2步操作。2) 勻漿:組織樣品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol,另外,組織體積不能超過Trizol體積的10%,否則勻漿效果會不好,用電動勻漿器充分勻漿約需1-2分鐘。從細胞中提取總RNA 1) 培養貼壁細胞:不須消化,可直接用Trizol進行消化、裂解,Trizol體積按10cm2/ml比例加入。 2) 懸浮細胞可直接收集、裂解,每1ml Trizol可裂解5×106動物、植物或酵母細胞,或107細菌細胞。 2.細胞或組織加Trizol后,室溫放置5min,使其充分裂解。注:此時可放入-70℃長期保持。 3.12000rpm 離心5min,棄沉淀。 4.按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿,振蕩混勻15分鐘,室溫放置15min。注:禁用漩渦振蕩器, 以免基因組DNA斷裂。 5.4℃12000g離心15min。 6.吸取上層水相,至另一離心管中。 注:1)千萬不要吸取中間界面。 2)若同時提取DNA和蛋白質,則保留下層酚相存于4℃冰箱,若只提RNA,則棄下層酚相。 7.按0.5ml異丙醇/ml Trizol 加入異丙醇混勻,室溫放置5-10min。 8.4℃ 12000g離心10min,棄上清,RNA沉于管底。 9.按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇,溫和振蕩離心管,懸浮沉淀。 10.4℃ 8000g離心5min,盡量棄上清。 11.室溫晾干或真空干燥5-10min。注:RNA樣品不要過于干燥,否則很難溶解。 12.可用50ul H2O,TE buffer或0.5%SDS溶解RNA樣品,55-60℃5-10min。 注:H2O、TE或0.5%SDS均須用DEPC處理并高壓。 12、測O.D值定量DNA濃度。 注:1)此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。 2) 產率估計:組織標本:(ug RNA/mg組織)1-10ug,培養細胞(ug RNA/106 Cell):5-15ug。 注:1、組織或細胞量過少,可酌情減少Trizol用量。 2、組織或細胞用量過多,會引起DNA對RNA的污染。 3、高蛋白,脂肪或多糖類組織,肌肉組織或塊狀植物組織等,組織勻漿或液氮研磨 后須4℃ 1200離心10min去掉不溶物,再進行下面操作,若頂層有脂肪物,則 也須去掉。 4、熱天提RNA,帶手套是必須的,手是RNase的主要來源。 5、組織塊用液氮研磨,效果,若沒有液氮或電動勻漿器,可用手動勻漿器代替, 此時組織塊不宜過大,且需先用眼科剪將組織絞碎,然后再充分研磨。
另有:invitrogen TRIzol:emoji: Reagent 15596018 200ML 包裝試劑,更多優惠 盡在慧穎生物!
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