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細(xì)胞活力檢測(cè)
在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力。由組織中分離細(xì)胞一般要檢查活力,以了解分離的過(guò)程對(duì)細(xì)胞是否有損傷作用;復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力,了解凍存和復(fù)蘇的效果。細(xì)胞懸液制備后,zui常用活體染料臺(tái)盼藍(lán)對(duì)細(xì)胞染色,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
正常細(xì)胞胞膜完整,臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色;而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞胞膜通透性增加,臺(tái)盼藍(lán)能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色(藍(lán)色)。
操作步驟:
1. 配制4%臺(tái)盼藍(lán)母液:稱取4g臺(tái)盼藍(lán),加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100mL,用濾紙過(guò)濾,4℃保存。使用時(shí)用PBS稀釋至0.4%。
2. 胰酶消化貼壁細(xì)胞,制備單細(xì)胞懸液,并作適當(dāng)稀釋(106 cells/mL)。
3. 取少量細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合,輕輕吹打混勻,染色2~3min。
4. 顯微鏡下觀察,死細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大,無(wú)光澤;活細(xì)胞保持正常形態(tài),無(wú)色透明有光澤。若需計(jì)算活細(xì)胞率則將染色的細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
活細(xì)胞率(%)= 活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100%
注意事項(xiàng):臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí),時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。否則,部分活細(xì)胞也會(huì)著色,會(huì)干擾計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。
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