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試驗過程中,生物樣本可能是zui敏感的,因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化,使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統一操作程序制備的菌株是微生物試驗結果一致性的重要保證。
(一)菌種保藏的重要性
菌種保藏是微生物學檢驗工作中的一項常規技術,菌種的科學保藏和管理直接關系到檢驗結果的正確性。
(二)菌種的來源
藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內或國外菌種收藏機構的標準菌株,或使用與標準菌株所有相關特性等效的商業派生菌株。
(三)菌種保藏的中心任務
⒈廣泛收集各種有用的微生物菌種。
⒉選擇zui適宜的保藏方法。
⒊研究、檢驗、交換和使用。
(四)菌種保藏的原則
⒈根據微生物菌種的生理、生化特性,在人工創造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度,使細胞基本上處于休眠狀態,生長繁殖受到抑制但不至于死亡,以減低菌種的變異率。
2.標準菌株的復活或培養物的制備應按供應商提供的說明或按驗證的方法進行。
3.標準儲備菌株-從國內、外菌種收藏機構獲得的標準菌株經復活并在適宜的培養基中生長后,既為標準儲備菌株。
4.低溫、干燥、缺氧、缺乏營養等環境條件都可以抑制微生物的代謝和生長繁殖,因此低溫、干燥和真空是菌種保藏的重要手段。
5.標準儲備菌株經純度和特性確認后保存時,可將培養物等份懸浮于抗冷凍的培養基中,并分裝于小瓶中,建議采用低溫冷凍干燥,液氮儲存,超低溫冷凍(低于-70℃)等方法保存。
6.低于-70℃或低溫冷凍干燥可以延長菌種的保存時間.標準儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉種的工作菌株。
7.冷凍菌株一旦解凍轉種制備工作菌株后,不得重新冷凍或再次使用。
8.工作菌株不可代替標準菌株,標準菌株的商業衍生物僅可用作工作菌株。
9.不同的微生物,應根據其生物特征來選擇zui適宜的保藏方法,菌種的保藏方法一般分四個階段:
⑴ 挑選特征典型的純菌菌落。
⑵確定保藏的合適菌體。
⑶選擇zui適宜的方法保藏。
⑷定期對保藏的菌種進行檢查。
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